PCR实验室辅料如何质检？

辅料质检的准则

辅料的质检通常是在新一批的辅料到实验室后统一做一次或者定期(半年或1年)做，因而质检就包含了验货和质检2个局部。由于辅料的质检没有一个统一的规范，普通由各实验室自行制定，可简可繁，这里提出一些办法供大家参考。

1.外包装检查：外包装应完好无损无污，标识分明，检查品名、品牌，货号，规格、消费日期，有效期、保管条件等信息。

2.内包装检查：内包装物品应与外包装标识分歧，检查能否有破损，走漏，内容物能否齐全，能否有相应的运用阐明书等。

3.性能质检：检测试剂耗材能否与其性能分歧，比方吸头的精确性和气密性等

4.污染物质检：检测试剂耗材能否被常规检测项目的待检物污染，这种污染可能是物品消费环节，也可能是运输或实验室的保管过程中被污染。

5.抑止物质检：检测试剂耗材中能否存在PCR的抑止物，比方核酸酶。

辅料质检的前提条件

1.弱阳性质控：需求准备弱阳性质控，包括规范物质、第三方质控或弱阳性样品用于停止性能质控和抑止物质控。

2.阴性质控：需求准备肯定阴性的样品或空白对照，用于停止污染物的质控。

常见辅料的质检

辅料的质检应分离实践工作中可能用到的场景，并非越苛刻越好，需求每个实验室分离本身状况来设计和调整文中提到的参数。

离心管

(1)、渗漏密闭性：将n个离心管参加半量墨汁，盖好盖子后放入水中，浸泡30min，没有墨汁渗出为合格。

(2)、离心密闭性：将n个离心管参加半量纯水，放入离心机，10000 rpm，30min，管盖未崩开未漏液为合格。

(3)、热密闭性：将n个离心管参加半量纯水，盖好盖子称重后放入金属浴中，65℃或90℃(巴氏消毒)，30min，再停止称重，离心管未变形，管盖未崩开未漏液，前后重量未变化为合格。。

(4)、冷密闭性：将n个离心管参加半量纯水，放入-20℃冰箱，24h，离心管未变形，管盖未崩开未漏液为合格。

(5)、污染物质检：将n个离心管分别参加半量阴性纯水，盖好盖子涡旋1 min后静置5min，汲取纯水作为模板停止扩增，qPCR无扩增为合格。

(6)、抑止物质检：将n个离心管分别参加弱阳性质控物,室温静置5min，然后停止提取;RNA核酸，DNA核酸，室温静置5min，作为模板停止扩增，qPCR扩增未被抑止为合格。

PCR管

(1)、渗漏密闭性：将n个PCR管参加半量墨汁，盖好盖子后放入水中，浸泡30min，没有墨汁渗出为合格。

(2)、离心密闭性：将n个PCR管参加半量纯水，放入离心机，1000 rpm，30min，管盖未崩开未漏液为合格。

(3)、热密闭性：将n个PCR管参加半量纯水，盖好盖子称重后放入PCR仪，设置一个常用的PCR程序，程序运转终了后，再停止称重，PCR管未变形，管盖未崩开未漏液，前后重量未变化为合格。

(4)、冷密闭性：将n个PCR管参加半量纯水，放入-20℃冰箱，24h，离心管未变形，管盖未崩开未漏液为合格。

(5)、污染物质检：将n个PCR管参加半量阴性纯水，盖好盖子涡旋1 min后静置5min，作为模板停止扩增，qPCR无扩增为合格。

(6)、抑止物质检：将n个PCR管分别参加弱阳性质控物,室温静置5min，然后停止提取;RNA核酸，DNA核酸，室温静置5min，作为模板停止扩增，qPCR扩增未被抑止为合格。

(7)、空白荧光通透性：关于qPCR,需求调查PCR管能否有非特异性荧光信号，将n个空PCR管，盖好盖子后放入PCR仪，设置一个常用的PCR程序，程序运转终了后，qPCR无扩增为合格。

(8)、阳性荧光通透性：关于qPCR,还需求调查PCR管能否会抑止荧光的通透性，将n个含弱阳性样品和扩增试剂的PCR管，与确认无荧光干扰的PCR管，盖好盖子后放入PCR仪一同扩增，设置一个常用的PCR程序，程序运转终了后，qPCR扩增未被抑止为合格。

吸头

(1)、精确性：将n个吸头分别汲取定量的纯水称重，重量与体积的关系依照1 g/mL换算。

(2)、气密性：取n个吸头，汲取最大量程的含有1%甘油的墨水，察看有色液体不呈现在滤塞之上，液面相同为合格。

(3)、防气溶胶性能：取n个吸头，汲取阳性核酸，重复吹吸10次，换另一个新吸头在阴性纯水中重复吹吸10次，取阴性纯水作为模板停止扩增，qPCR无扩增为合格。

(4)、污染物质检：取n个吸头，汲取阴性纯水重复吹吸10次，取阴性纯水作为模板停止扩增，qPCR无扩增为合格。

(5)、抑止物质检：取n个吸头，汲取弱阳性质控物重复吹吸10次，然后停止提取;汲取RNA核酸和DNA核酸重复吹吸10次，作为模板停止扩增，qPCR扩增未被抑止为合格。

采血管、采样管、采样拭子和一次性吸管

(1)、污染物质检：将n个耗材参加一定量阴性纯水，盖好盖子涡旋1 min后静置30min，汲取纯水作为模板停止扩增，qPCR无扩增为合格。

(2)、抑止物质检：将n个耗材分别参加弱阳性质控物,室温静置30min，然后汲取质控物停止提取;作为模板停止扩增，qPCR扩增未被抑止为合格。

无核酸酶水、PBS等缓冲液

(1)、PH值：丈量各缓冲液的PH值。

(2)、污染物质检：汲取缓冲液作为模板停止扩增，qPCR无扩增为合格。

(3)、抑止物质检：将缓冲液分别与RNA核酸和DNA核酸混合，然后汲取混合液作为模板停止扩增，qPCR扩增未被抑止为合格。

移液器和离心管架及离心机的内表面

(1)、外表核酸污染：用沾湿的拭子擦拭上述物品的表面面，然后浸泡到纯水中10min，汲取纯水作为模板停止扩增，qPCR无扩增为合格。

(2)、移液器内腔核酸污染：关于常用的移液器的内部，可运用无滤芯的吸头在阴性纯水中吹吸10次后，汲取纯水作为模板停止扩增，qPCR无扩增为合格。

(3)、细菌污染：用沾湿的无菌拭子擦拭上述物品的表面面，划琼脂平板，每个平板的菌落数不应超越一定数量(我也不肯定几适宜，由于不请求无菌操作一定会有细菌，但是也不应该太多)。