为什么PCR方舱实验室要三区隔离

在专业的PCR实验（比如临床PCR检验实验室）室通常有四区隔离（或至少是三区隔离）的要求。

常见的三区指的是：

1、试剂配制区：PCR反应体系的配置区域。

2、标本处理区：包括扩增模板的制备，也就是我们常常提取DNA的地方；

3、PCR扩增和产物分析区：进行PCR扩增的区域，也是扩增产物进行凝胶电泳分析的区域。

如果将PCR扩增区域和产物分析区再次分开，就是四区隔离了。

四区隔离，主要目的是防止气溶胶在各个PCR区域之间的流动—最好的方法是干脆每个区域隔一幢楼，那肯定是最佳的隔离措施了，但操作起来肯定不现实，于是便有了针对不同区域设置正负压的方法：

试剂配制区（Ⅰ区）：最洁净的区域，保持微正压使得外界空气无法进入隔离污染源。并且阴性模板应该在此区加入PCR管并盖盖，严禁在此区域打开、存放装有DNA模板的离心管；

DNA模板添加区（Ⅱ区）：保持微负压，保证内部空气不外泄，以免阳性模板的气溶胶对外界环境造成污染。

扩增及PCR产物分析区（Ⅲ区）：保持微负压，使得内部空气不外泄，以免扩增产物的气溶胶对外界环境造成污染。

操作时遵循Ⅰ区→Ⅱ区→Ⅲ区单一方向进行，不可逆向进行。

对于科研用途的PCR实验室，如果无法达到严格的三区隔离的要求，至少也要做到两区隔离：即正压区和负压区。正压区实施Ⅰ区的功能，负压区实施Ⅱ区，Ⅲ区的功能。

最忌讳也是最可怕的是反过来，在正压区实施Ⅲ区的功能。我们有个用户的所有实验室都是正压—因为进入实验室的空气都是经过过滤的。他信心满满地认为他们的实验室超干净，做PCR绝对没问题，但他们实验室出现了最严重的PCR产物污染问题—所有的阴性对照都是阳性。所以PCR实验室的洁净度是次要的，不同区域间的空气是互相之间否有流通才是最关键的。

如果有的同学问，我们的实验室没有正负压的区分，或者是全负压，全正压怎么办呢？那我们的建议是：别怕麻烦，找个远离Ⅲ区（通俗地讲就是打开PCR扩增产物的盖子区域，比如电泳区）的实验室当作PCR I区使用，能省掉后续更多的麻烦。

既然PCR三区隔离的目的是为了阻断气溶胶的交流，请注意以下细节，思考一下气溶胶来自哪里：

1. 如果条件允许，在PCRⅢ区工作结束后再次进入PCR I区需要更换实验服、一次性鞋套、帽子、手套。

2. 每个区域都应配备专用的移液器吸头，不可交叉混用。

3. 每个区域都应配备专用的移液器，不可交叉混用。我们的一位用户拿电泳室的移液器加模板，阴性对照扩出了很亮的条带。

4. 在PCR I区、PCRⅡ区配备带滤芯吸头。

很多做PCR的同学会将做PCR的吸头灭菌、或者是在超净台做PCR操作。但在小编看来这完全没有必要，因为做好PCR最重要的是防止扩增产物的污染，而不是无菌操作！试想一下，高压灭菌了又如何，DNA并不会因此而降解多少，如果细菌的DNA会参与PCR扩增，那么无论活菌或是细菌尸体都一样能扩增出DNA 条带。